各直屬檢驗檢疫局：

　　最近，英國食品標準署連續(xù)公布了在部分食品中發(fā)現(xiàn)違規(guī)添加染料對位紅。對位紅是一種常用于工業(yè)生產(chǎn)的紅色顏料，也稱對硝基苯胺紅，化學成分類似于蘇丹紅1號，對人類的眼睛、皮膚和呼吸系統(tǒng)有刺激作用，我國禁止應(yīng)用于食品加工生產(chǎn)。

　　為保護消費者健康，防止含對位紅食品進入市場，各局自即日開始，要對進出口食品中可能使用紅色染料的產(chǎn)品同時進行蘇丹紅和對位紅的檢測，一旦發(fā)現(xiàn)立刻封存，并將情況上報總局。

　　北京檢驗檢疫局已經(jīng)參考歐盟0399標準開展對位紅項目的檢測，現(xiàn)將其對位紅檢測方法印發(fā)給你們，供開展對位紅檢測時參考使用。如有檢測技術(shù)方面的疑問，可直接與北京局聯(lián)系解決。

　　附件1：

食品中對位紅的檢測——高效液相色譜法（初步方案）（北京出入境檢驗檢疫局食品安全檢測中心提供）

　　1 應(yīng)用范圍

　　本方法涉及以辣椒為主要或配料成分的食品和以番茄原料為基質(zhì)的食品中違禁著色劑對位紅的檢測。

　　2 定義

　　對位紅又稱對硝基苯胺紅，是一種工業(yè)用偶氮染料，不溶于水易溶于有機溶劑，不允許在食品中使用。

　　3 方法要點

　　對位紅染料經(jīng)乙腈超聲提取后，過濾，濾液用反相高效液相色譜儀進行色譜分析。以波長可變的紫外—可見檢測器定性和定量。

　　4 試劑與標準品

　　除有特殊指明外，本方法中涉及試劑均為分析純，實驗用水均為超純水。

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　　│　試劑與標準品名稱　│　　規(guī)格　　│　 級別　 │
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│乙腈　　　　　　　　│4L／瓶　　　│HPLC級　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│二氯甲烷　　　　　　│4L／瓶　　　│HPLC級　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│冰醋酸　　　　　　　│500ml／瓶　 │分析純　　│
　　├──────────┼──────┼─────┤
　　│對位紅　　　　　　　│　　　　　　│　　　　　│
　　└──────────┴──────┴─────┘

　　5　標準溶液

　　5.1　標準貯備液

　　稱取20.0mg對位紅（按產(chǎn)品標明的純度折算成純著色劑），用乙腈溶解并定容至100ml容量瓶。

　　5.2　標準工作液

　　分別取上述標準貯備液50μl、100μl、200μl、500μl和1000μl溶液移入100ml容量瓶中以乙腈定容，此時溶液中對位紅的濃度分別為0.1，0.2，0.4，1.0和2.0μg／ml.

　　6 儀器與設(shè)備

　　┌─────────────────┬─────────┐
　　│　　　 前處理儀器與設(shè)備　　　　　 │　分析儀器與設(shè)備　│
　　├─────────────────┼─────────┤
　　│萬分之一天平　　　　25ml具塞比色管│　　　　　　　　　│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
　　│電子天平　　　　　　250ml燒杯　　 │配有紫外—可見檢測│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│器及自動進樣器的反│
　　│打漿機　　　　　　　100ml容量瓶　 │向HPLC　　　　　　│
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
　　│超聲波震蕩提取儀　　0．45μm濾膜　│CLOVERSIL-C18　　 │
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│色譜柱4．6×250mm │
　　│　　　　　　　　　　　　　　　　　│5μm　　　　　　　│
　　│5ml一次性注射器　　　　　　　　　 │　　　　　　　　　│
　　│漩渦振蕩器　　　　　　　　　　　　│　　　　　　　　　│
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　　7　樣品處理方法

　　7.1　甜椒或紅辣椒粉

　　稱取10g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.2　粉狀調(diào)味品

　　稱取5g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.3　調(diào)味辣椒醬、原味辣椒醬、辣椒油等

　　稱取5g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.4　以番茄原料為基質(zhì)的番茄醬和番茄沙司

　　稱取10g（準確至0.01g）樣品于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至25ml并搖勻。

　　7.5　提取

　　將稱量好的樣品在超聲波提取儀中充分超聲提取60分鐘，并不時搖勻。

　　7.6　上樣

　　用5ml一次性注射器抽取一定體積的提取液，將提取液過0.45μm有機系濾膜至進樣瓶中，擰緊瓶蓋，在漩渦振蕩器上振蕩30秒，使溶液充分混勻，待測。

　　8　色譜分析

　　8.1　高效液相色譜測定

　　8.1.1　流動相

　　流動相A：10％乙酸溶液

　　流動相B：乙腈

　　8.1.2　梯度洗脫程序

　　┌─────┬─────┬─────┬────┐
　　│時間(Min) │流動相A％ │流動相B％ │梯度曲線│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│0　　　　 │20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│5　　　　 │20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│7　　　　 │0　　　　 │100　　　 │線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│25　　　　│0　　　　 │100　　　 │線性　　│
　　├─────┼─────┼─────┼────┤
　　│26　　　　│20　　　　│80　　　　│線性　　│
　　└─────┴─────┴─────┴────┘

　　8.1.3　流速：1.0ml／min

　　8.1.4　進樣量：20μl

　　8.1.5　檢測波長

　　紫外—可見檢測器或二極管陣列檢測器，485nm檢測。

　　8.1.6　色譜柱

　　CLOVERSIL—C18色譜柱4.6×250mm 5μm　　8.1.7　柱溫：室溫

　　注：待基線穩(wěn)定后開始進樣，兩次進樣間隙時間為10分鐘

　　9　結(jié)果計算

　　9.1　標準曲線

　　用5點標準工作溶液的測定值繪制標準曲線，標準溶液濃度在0.1～2.0μg／ml范圍內(nèi)呈良好線性。（R＞0.995）

　　9.2　樣品結(jié)果計算

　　對位紅含量按以下公式計算：

　　R＝C×V×D／M單位：mg／kg

　　C——樣品中待測組分的濃度，單位：μg／ml

　　M——檢測樣品取樣量（g）

　　V——樣品溶液體積（ml）

　　D——樣品溶液的稀釋倍數(shù)

　　10　注意事項

　　10.1　對位紅與蘇丹類染料化學結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相類似，使用該色譜條件出峰時間約為5～6分鐘。

　　10.2　使用該方法可同時檢測蘇丹橙G、蘇丹Ⅰ、蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹紅7B、胭脂樹橙等。

　　附件2：

英國食品標準署公布的69種對位紅污染食品名單