一、概述
　　狂犬病是由狂犬病病毒引起的一種人獸共患傳染病，按《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》的規(guī)定為乙類傳染病。許多種類的哺乳動(dòng)物都與狂犬病的傳播有關(guān)，犬是發(fā)展中國(guó)家人狂犬病最主要的儲(chǔ)存宿主和傳播宿主。人感染狂犬病最常見的方式是通過感染狂犬病毒的犬、貓、野生食肉動(dòng)物以及食蟲和吸血蝙蝠的咬傷、撓抓、舔舐皮膚或粘膜破損處而感染?？袢《局饕ㄟ^破損的皮膚或粘膜侵入人體，經(jīng)神經(jīng)末梢上行進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，臨床表現(xiàn)主要為急性、進(jìn)行性、幾乎不可逆轉(zhuǎn)的腦脊髓炎，病死率100％。
　　狂犬病在世界范圍內(nèi)廣泛分布。據(jù)1999年世界狂犬病調(diào)查報(bào)告，145個(gè)國(guó)家和地區(qū)中僅有45個(gè)無狂犬病報(bào)告。近年來，我國(guó)狂犬病疫情一直呈上升趨勢(shì)，病死數(shù)居我國(guó)37種法定報(bào)告?zhèn)魅静∈孜弧?996年全國(guó)報(bào)告狂犬病發(fā)病數(shù)曾一度較低，為159例，而2004年全國(guó)狂犬病報(bào)告發(fā)病數(shù)上升至2660例，與2003年同期相比上升30.58%。2004年狂犬病死亡人數(shù)占我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静】偹劳鰳?gòu)成的35.72%。我國(guó)的廣西、湖南、江蘇、安徽、湖北、廣東和貴州等省份近年來疫情持續(xù)上升，疫情形勢(shì)十分嚴(yán)峻。因此，建立全國(guó)狂犬病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，在狂犬病多發(fā)地區(qū)開展監(jiān)測(cè)，分析狂犬病流行因素、掌握狂犬病的疫情特點(diǎn)與流行趨勢(shì)，對(duì)于狂犬病的預(yù)防和控制具有重要的意義。
　　二、監(jiān)測(cè)目的
　?。ㄒ唬┱莆瘴覈?guó)狂犬病的疫情動(dòng)態(tài)和流行規(guī)律，分析流行因素，為制定有效的預(yù)防控制措施提供科學(xué)依據(jù)。
　?。ǘ┝私饪袢”┞逗箢A(yù)防處置現(xiàn)狀，評(píng)價(jià)預(yù)防處置效果，為進(jìn)一步規(guī)范暴露后預(yù)防處置提供依據(jù)。
　　三、監(jiān)測(cè)定義
　?。ㄒ唬┎±x
　　根據(jù)流行病學(xué)史、臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果三項(xiàng)指標(biāo)確定病例的定義。
　　1、流行病學(xué)史
　　有被犬、貓或其他宿主動(dòng)物舔、咬史。
　　2、臨床癥狀
　?。?）愈合的咬傷傷口或周圍感覺異常、麻木發(fā)癢、刺痛或蟻?zhàn)吒小３霈F(xiàn)興奮、煩躁、恐懼，對(duì)外界刺激如風(fēng)、水、光、聲等異常敏感。
　?。?）“恐水”癥狀，伴交感神經(jīng)興奮性亢進(jìn)（流涎、多汗、心律快、血壓增高），繼而肌肉癱瘓或顱神經(jīng)癱瘓（失音、失語、心律不齊）。
　　3、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
　　（1）免疫熒光抗體法檢測(cè)抗原：發(fā)病第一周內(nèi)取唾液、鼻咽洗液或腦脊液涂片、角膜印片、皮膚切片，用抗狂犬病熒光抗體染色，狂犬病病毒抗原陽性。
　?。?）RT-PCR方法檢測(cè)病毒核酸：發(fā)病第一周內(nèi)取唾液、鼻咽洗液、腦脊液、角膜或皮膚組織，用RT-PCR方法檢測(cè)狂犬病毒核酸陽性。
　?。?）死后腦組織標(biāo)本分離病毒陽性或印片熒光抗體染色陽性、腦組織內(nèi)檢到內(nèi)基氏小體或RT-PCR方法檢測(cè)腦組織標(biāo)本中病毒核酸陽性。
　　4、病例分類
　?。?）狂犬病疑似病例：指各級(jí)醫(yī)療單位臨床醫(yī)生上報(bào)的具有狂犬病臨床表現(xiàn)，而難以確診為狂犬病的病例。
　?。?）臨床診斷病例：流行病學(xué)史加上臨床表現(xiàn)的任意一條。
　　（3）確診病例：臨床診斷病例加上實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的任意一條。
　?。ǘ┛袢”┞墩叨x
　　狂犬病暴露者指被狂犬、疑似狂犬或狂犬病宿主動(dòng)物抓傷、咬傷、舔舐皮膚或粘膜破損處的所有人員。
　　四、監(jiān)測(cè)內(nèi)容
　?。ㄒ唬┤珖?guó)常規(guī)監(jiān)測(cè)
　　1.病例的發(fā)現(xiàn)與報(bào)告
　　按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《傳染病疫情報(bào)告管理規(guī)范》，各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或?qū)嶒?yàn)室確診病例應(yīng)在診斷后24小時(shí)內(nèi)填寫報(bào)告卡進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。不具備網(wǎng)絡(luò)直報(bào)條件的應(yīng)在診斷后24小時(shí)內(nèi)向相應(yīng)單位送（寄）出傳染病報(bào)告卡，縣級(jí)疾病預(yù)防控制中心（以下簡(jiǎn)稱疾控中心）和具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院收到傳染病報(bào)告卡后立即進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。
　　2.病例個(gè)案調(diào)查
　　縣級(jí)疾控中心接到狂犬病例報(bào)告后，應(yīng)及時(shí)對(duì)病例進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容見《狂犬病病例個(gè)案調(diào)查表》（附表1）。
　?。ǘ┍O(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)
　　1.監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選擇原則
　?。?）在近五年疫情持續(xù)高發(fā)的省，選取高發(fā)縣區(qū)作為國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)；
　?。?）監(jiān)測(cè)點(diǎn)具有一定的狂犬病防制工作基礎(chǔ)，能夠承擔(dān)并完成監(jiān)測(cè)任務(wù)；
　?。?）監(jiān)測(cè)點(diǎn)的確定：在近年來疫情持續(xù)高發(fā)的廣西、湖南、安徽、貴州4省，選擇高發(fā)地市或縣區(qū)作為國(guó)家監(jiān)測(cè)點(diǎn)。
　　2.監(jiān)測(cè)內(nèi)容
　?。?）常規(guī)疫情監(jiān)測(cè)
　　①病例的發(fā)現(xiàn)與報(bào)告
　　同全國(guó)常規(guī)監(jiān)測(cè)。
　?、诓±齻€(gè)案調(diào)查
　　監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在的縣級(jí)疾控中心接到狂犬病病例報(bào)告后，應(yīng)對(duì)所有病例進(jìn)行個(gè)案調(diào)查，填寫《狂犬病病例個(gè)案調(diào)查表》（附表1）。
　　（2）實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)
　?、贅?biāo)本采集、保存和送檢：嚴(yán)格按照《狂犬病標(biāo)本采集技術(shù)指南》（見附件1）要求，采集監(jiān)測(cè)點(diǎn)報(bào)告的所有臨床診斷病例的唾液、腦脊液、尿液、鼻咽洗液、皮膚組織或病死者腦組織等標(biāo)本，送至省級(jí)疾控中心進(jìn)行檢測(cè)（送檢表見附表2《狂犬病人標(biāo)本送檢登記表》）。
　　②標(biāo)本檢測(cè)：省級(jí)疾控中心負(fù)責(zé)本省監(jiān)測(cè)點(diǎn)標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，采用RT-PCR方法檢測(cè)狂犬病毒特異性核酸，采用免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)狂犬病毒抗原，對(duì)病毒抗原和核酸陽性的標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸測(cè)序和分析。詳細(xì)操作過程見《狂犬病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》（附件2）。
　?、劢Y(jié)果鑒定：各省疾控中心將核酸測(cè)序和分析結(jié)果上報(bào)至國(guó)家疾控中心進(jìn)行鑒定和分析。
　?、軐?shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的匯總、反饋：省疾控中心每季度末將本季度檢測(cè)結(jié)果匯總并反饋到各監(jiān)測(cè)點(diǎn)，國(guó)家疾控中心接到標(biāo)本后一個(gè)月之內(nèi)將鑒定結(jié)果向各省反饋。
　?。?）狂犬病暴露后預(yù)防處置情況監(jiān)測(cè)
　　各監(jiān)測(cè)點(diǎn)選擇1所縣區(qū)級(jí)疾控中心預(yù)防門診、1所縣及縣以上綜合醫(yī)院和1所高發(fā)鄉(xiāng)的衛(wèi)生院進(jìn)行狂犬病暴露后預(yù)防處置情況監(jiān)測(cè)，由診治大夫負(fù)責(zé)填寫《狂犬病暴露人群門診登記表》（附表4），收集前來就診的所有狂犬病暴露者的預(yù)防處置相關(guān)信息。
　　（4）宿主動(dòng)物監(jiān)測(cè)
　　監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在地的疾控中心通過當(dāng)?shù)匦竽?、獸醫(yī)、公安等相關(guān)部門調(diào)查、了解所轄地區(qū)的犬等宿主動(dòng)物情況，包括犬和其它有關(guān)動(dòng)物的數(shù)量、種類和免疫覆蓋等情況（調(diào)查表見附表5）。在可能情況下，對(duì)犬及其他宿主動(dòng)物進(jìn)行帶毒情況調(diào)查。
　　五、數(shù)據(jù)收集、分析、反饋
　?。ㄒ唬?shù)據(jù)收集
　　1.狂犬病疫情法定報(bào)告信息
　　各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《傳染病疫情與突發(fā)公共衛(wèi)生事件報(bào)告管理規(guī)范》的相關(guān)規(guī)定，對(duì)狂犬病病例進(jìn)行報(bào)告。
　　2.狂犬病病例個(gè)案信息
　　縣級(jí)疾控中心指定專人負(fù)責(zé)收集狂犬病病例個(gè)案信息，于每月10日以前將上月所有個(gè)案調(diào)查表錄入狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)，并上報(bào)省級(jí)疾控中心。省級(jí)疾控中心每月20日前將本省上月的狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)上報(bào)中國(guó)疾控中心。
　　3.狂犬病實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)信息
　　省級(jí)疾控中心負(fù)責(zé)收集、匯總轄區(qū)內(nèi)狂犬病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，每季度末將本季度的結(jié)果錄入狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)，上報(bào)中國(guó)疾控中心。
　　4.狂犬病暴露者門診匯總數(shù)據(jù)
　　監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在的縣級(jí)疾控中心負(fù)責(zé)收集轄區(qū)內(nèi)狂犬病門診的《狂犬病暴露人群門診登記表》（附表4），于每月10日前進(jìn)行匯總并將匯總結(jié)果錄入狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)，報(bào)告上級(jí)疾控中心。
　　5.狂犬病宿主動(dòng)物基本情況調(diào)查數(shù)據(jù)
　　監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在的縣級(jí)疾控中心負(fù)責(zé)收集轄區(qū)內(nèi)狂犬病宿主動(dòng)物的基本情況，每年1月15日將上年的《狂犬病宿主動(dòng)物基本情況調(diào)查表》（附表5）的內(nèi)容錄入狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)，并將數(shù)據(jù)報(bào)告上級(jí)疾控中心，各省疾控中心負(fù)責(zé)收集省內(nèi)所有狂犬病監(jiān)測(cè)點(diǎn)的數(shù)據(jù)，并于每年2月15日前上報(bào)上年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。
　?。ǘ?shù)據(jù)質(zhì)量控制
　　1.方法和標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一
　?。?）各項(xiàng)調(diào)查內(nèi)容均使用統(tǒng)一調(diào)查表和調(diào)查方法；
　?。?）使用指定的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法和檢測(cè)試劑進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。
　　2．?dāng)?shù)據(jù)庫(kù)建立的質(zhì)量控制
　?。?）使用統(tǒng)一的數(shù)據(jù)庫(kù)錄入數(shù)據(jù)；
　　（2）通過設(shè)計(jì)計(jì)算機(jī)軟件來識(shí)辨調(diào)查表邏輯錯(cuò)誤，減少錄入錯(cuò)誤；
　　（3）通過人工抽查核對(duì)，發(fā)現(xiàn)非邏輯錯(cuò)誤。
　?。ㄈ┵Y料分析
　　各級(jí)疾控中心每季度、每年對(duì)狂犬病監(jiān)測(cè)資料進(jìn)行分析，也可根據(jù)需要不定期地進(jìn)行分析。
　　1.病例的三間分布
　　從時(shí)間、地區(qū)、人群分布分析狂犬病的發(fā)病死亡特點(diǎn)。
　　2.病例的暴露情況分析
　　對(duì)致傷動(dòng)物的種類、病例的傷口狀況、預(yù)防處置情況等進(jìn)行分析。
　　3.暴露人群治療處置情況分析
　　對(duì)狂犬病暴露人群的特點(diǎn)，以及傷口處理、預(yù)防接種等情況進(jìn)行分析。
　　4.狂犬病宿主動(dòng)物分析
　　對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)狂犬病宿主動(dòng)物的數(shù)量、密度、免疫情況以及不同傷人動(dòng)物的情況進(jìn)行分析。
　　5.狂犬病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析
　　分析狂犬病病原學(xué)及其遺傳變異情況。
　　6.流行因素分析
　　綜合監(jiān)測(cè)結(jié)果及當(dāng)?shù)厥占降南嚓P(guān)信息對(duì)狂犬病的流行因素進(jìn)行綜合分析。（四）信息交流和反饋
　　各級(jí)疾控中心應(yīng)由專人負(fù)責(zé)監(jiān)測(cè)工作，定期將有關(guān)監(jiān)測(cè)報(bào)告、統(tǒng)計(jì)分析和季度、年度總結(jié)以E-Mail、傳真或信函的形式報(bào)上級(jí)疾控部門和同級(jí)衛(wèi)生行政部門。上級(jí)疾控部門接到報(bào)告后，應(yīng)及時(shí)對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行反饋（以文件、信函、督導(dǎo)等方式）。
　　各監(jiān)測(cè)點(diǎn)應(yīng)定期將監(jiān)測(cè)結(jié)果向鄰近的地區(qū)及相關(guān)部門（如畜牧獸醫(yī)部門）進(jìn)行通報(bào)。
　　六、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的組成和職責(zé)
　　（一）衛(wèi)生行政部門
　　衛(wèi)生部領(lǐng)導(dǎo)和組織協(xié)調(diào)全國(guó)狂犬病監(jiān)測(cè)工作，各級(jí)衛(wèi)生行政部門負(fù)責(zé)組織開展本轄區(qū)內(nèi)狂犬病監(jiān)測(cè)工作，并提供所需的監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)，保證監(jiān)測(cè)工作的順利開展。
　　（二）疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)
　　1.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
　?。?）組織監(jiān)測(cè)方案的起草、論證和完善，為全國(guó)狂犬病監(jiān)測(cè)提供技術(shù)指導(dǎo)。
　?。?）組織對(duì)全國(guó)各省級(jí)疾控中心和國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)專業(yè)技術(shù)人員的培訓(xùn)。
　?。?）負(fù)責(zé)全國(guó)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的收集、整理，定期對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、反饋。
　?。?）負(fù)責(zé)狂犬病診斷試劑的標(biāo)準(zhǔn)化及各級(jí)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。
　　（5）負(fù)責(zé)各省分離的狂犬病病毒的實(shí)驗(yàn)室鑒定工作。
　　（6）負(fù)責(zé)組織專家定期對(duì)全國(guó)狂犬病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行督導(dǎo)、評(píng)價(jià)。
　?。?）每年組織召開全國(guó)狂犬病監(jiān)測(cè)年度工作總結(jié)研討會(huì)。
　　2.省級(jí)疾控中心
　?。?）根據(jù)全國(guó)監(jiān)測(cè)方案，起草本省的監(jiān)測(cè)實(shí)施方案，并組織實(shí)施。
　?。?）有效組織實(shí)施本省的常規(guī)監(jiān)測(cè)工作。
　?。?）組織對(duì)市級(jí)疾控中心和國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的專業(yè)技術(shù)人員的培訓(xùn)與指導(dǎo)。
　?。?）定期收集監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行分析、反饋。
　?。?）定期對(duì)本省的監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行督導(dǎo)與評(píng)價(jià)。
　?。?）每年對(duì)本省狂犬病監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行年度總結(jié)。
　　3.市級(jí)疾控中心
　?。?）有效組織實(shí)施本市的常規(guī)監(jiān)測(cè)工作。
　　（2）指導(dǎo)本市國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作。
　　（3）定期收集監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，并進(jìn)行分析、反饋。
　?。?）定期對(duì)本市的監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行督導(dǎo)、質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。
　?。?）每年對(duì)本市狂犬病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行年度工作總結(jié)。
　　4.縣級(jí)疾控中心
　?。?）根據(jù)全國(guó)監(jiān)測(cè)方案和省級(jí)的監(jiān)測(cè)實(shí)施方案的要求，遂項(xiàng)落實(shí)各項(xiàng)監(jiān)測(cè)工作。
　　（2）接受上級(jí)疾控中心技術(shù)的培訓(xùn)與指導(dǎo)，規(guī)范各項(xiàng)監(jiān)測(cè)工作。
　?。?）安排專人定期收集、整理、匯總和上報(bào)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。
　?。?）定期對(duì)監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。
　　（5）每年對(duì)本地狂犬病監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行年度工作總結(jié)。
　?。ㄈ┽t(yī)療機(jī)構(gòu)
　　各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)狂犬病病例的發(fā)現(xiàn)及報(bào)告工作，協(xié)助縣、區(qū)級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查及標(biāo)本采集工作。對(duì)醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行業(yè)務(wù)培訓(xùn)，尤其是傳染病防治法及相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)。
　　七、保障工作
　?。ㄒ唬┙M織保障
　　1.狂犬病監(jiān)測(cè)應(yīng)納入當(dāng)?shù)丶部刂行娜粘９ぷ鳌?br/>　　2.各級(jí)疾控中心應(yīng)明確一名業(yè)務(wù)領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)監(jiān)測(cè)工作。
　　3.承擔(dān)監(jiān)測(cè)任務(wù)的各級(jí)疾控中心應(yīng)指定責(zé)任心強(qiáng)、業(yè)務(wù)能力強(qiáng)的專業(yè)技術(shù)人員具體實(shí)施監(jiān)測(cè)工作。
　　4.參加監(jiān)測(cè)工作的各單位應(yīng)加強(qiáng)相關(guān)業(yè)務(wù)人員的培訓(xùn)。
　　（二）經(jīng)費(fèi)保障
　　1.為保障監(jiān)測(cè)工作的順利進(jìn)行，國(guó)家為監(jiān)測(cè)點(diǎn)提供一定的監(jiān)測(cè)啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)。
　　2.監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在的省、市、縣應(yīng)提供監(jiān)測(cè)配套經(jīng)費(fèi)。
　　3.監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)必須實(shí)行專款專用。
　?。ㄈ┪镔Y保障
　　承擔(dān)監(jiān)測(cè)任務(wù)的各級(jí)疾控中心和醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)保證監(jiān)測(cè)所需的各種物資和技術(shù)支持。由中國(guó)疾控中心統(tǒng)一提供監(jiān)測(cè)點(diǎn)檢測(cè)試劑。
　?。ㄋ模┵|(zhì)量控制
　　1.每年組織監(jiān)測(cè)工作的質(zhì)量評(píng)價(jià)。
　　2.每年根據(jù)監(jiān)測(cè)點(diǎn)疫情變化，對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)和監(jiān)測(cè)工作計(jì)劃進(jìn)行必要的調(diào)整。
　　附表1：狂犬病病例個(gè)案調(diào)查表
　　縣（市）名稱：　　　　國(guó)標(biāo)碼：□□□□□□　　 病例編號(hào)：□□□□□
　　1、一般情況
　　1.1　姓名：　　1.2　性別：□1男　□2女　　　　　 1.3　年齡：　　　歲　　 1.4職業(yè)：□1農(nóng)民　 □2工人　 □3學(xué)生　 □4散童　 □5其它　　　
　　1.5詳細(xì)住址：　　　　　　?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）　　　　 市（地區(qū)）　　　　　 縣（區(qū)）　　　　鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）　　　　　　村（居委會(huì)）　　　　　組（門牌號(hào)）
　　2、暴露（被傷）及傷口處理情況
　　2.1　暴露（被傷）日期：　　 年　　 月　　 日　　 時(shí)
　　2.2　暴露詳細(xì)地址：　　　　　 ?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）　　　　　市（地區(qū)）　　　　縣（區(qū)）　　　　　 鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）　　　　　　村（居委會(huì)）　　　　　組（門牌號(hào)）
　　2.3　暴露方式： □1咬傷　□2抓傷　□3其它　　　
　　2.4　暴露程度：□1 Ⅰ度 □2 Ⅱ度　□3 Ⅲ度
　　2.5　暴露部位（可多選）：□1頭面　　 □2頸部　　 □3軀干　　 □4手臂　　　□5手部　　 □6下肢膝以上　　 □7下肢膝以下
　　2.6　傷口處理：□1未處理（轉(zhuǎn)至3）　　□2自行處理　　□3醫(yī)療機(jī)構(gòu)處理
　　2.6.1　處理時(shí)間：　　 年　　 月　　 日　　 時(shí)
　　2.6.2　處理單位：□1村衛(wèi)生室　□2鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院　□3縣級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)　□4其他　　
　　2.6.3　處理方式（可多選）：
　　□1擠壓出血　 □2沖洗　 □3消毒　 □4傷口縫合　 □5其他　　　
　　3、預(yù)防注射
　　3.1　暴露免疫史：□1有（免疫時(shí)間　　年　 月　 日， 免疫針次　　 針），□2無
　　3.2　暴露后抗血清注射：□1有，□2無（轉(zhuǎn)至3.3）
　　3.2.1　種類：□1免疫球蛋白　□2抗血清
　　3.2.2　注射時(shí)間：　　 年　　月　　日
　　3.2.3　注射劑量：　　　
　　3.2.4　有無過敏：□1有（過敏表現(xiàn)：　　　　　　　　 ）　□2無
　　3.3　暴露后人用狂犬病疫苗注射：□1有，□2無（轉(zhuǎn)至4）
　　3.3.1　注射單位：□1村衛(wèi)生室　 □2鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院　□3縣級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)　□4其他　　
　　3.3.2　種類：□1 Vero　 □2地鼠腎
　　3.3.3　首針時(shí)間：　　　年　　月　　日　　 時(shí)，首針劑量：□1劑　□2劑
　　3.3.4　免疫程序：□1 0-3-7-14-28　　□2其他　　　　　　
　　3.3.5　疫苗注射　　　 針次，如未全程，原因：　　　　　　　　　　　
　　3.3.6　是否加強(qiáng)注射：□1是（加強(qiáng)針次：　　針）， □2否
　　3.3.7　疫苗生產(chǎn)單位：　　　　　　　，批號(hào)：　　　　　 ，失效期：　　　年　　月　　日
　　4、臨床資料
　　4.1　發(fā)病時(shí)間：　　　年　　月　　日
　　4.2　死亡時(shí)間：　　　年　　月　　日
　　4.3　診斷單位：□1村衛(wèi)生室　 □2鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院　□3縣級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)　□4其他　　　
　　4.4　發(fā)病臨床癥狀（可多選）：□1煩躁　□2恐水　□3怕風(fēng)　□4畏光　□5抽搐　□6精神失常
　　5、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
　　5.1　采樣時(shí)間：　　　年　　月　　日　　　　　　　
　　5.2　標(biāo)本種類：□1唾液　□2腦脊液 □3尿液　□4鼻咽洗液
　　5.3　檢測(cè)項(xiàng)目：□1病原檢測(cè)　 □2核酸檢測(cè)　
　　5.4　檢測(cè)結(jié)果：□1陽性　 □2陰性
　　6、傷人動(dòng)物情況
　　6.1　動(dòng)物種類：□1狗　□2貓　□3其它　　　
　　6.2　傷人動(dòng)物來源：□1自家養(yǎng)　□2鄰居養(yǎng)　□3流浪動(dòng)物　□4野生動(dòng)物　□5其它
　　6.3　若為家養(yǎng)動(dòng)物，是否接種獸用狂犬病疫苗：□1是（接種日期：　　 年　　月　　日），□2否
　　6.4　動(dòng)物傷人原因：□1主動(dòng)襲擊　□2自衛(wèi)傷人　□3嘻逗　□4其他　　　
　　6.5　是否同時(shí)咬傷多人：□1是，□2否
　　6.6　傷人后：□1如常（轉(zhuǎn)至7）　□2打死　□3失蹤　□4病死　□5宰殺　□6其他　　　
　　6.6.1　死亡時(shí)間：　　　年　　月　　日
　　6.6.2　動(dòng)物死后處理方式：
　　□1焚燒　□2深埋　□3出售　 □4丟棄 □5屠宰剝皮　□6烹食　□7其它
　　7、如為一犬傷多人
　　7.1　共傷　　人　　　　　
　　7.2　本例為第　　例次　　　　　
　　7.3　共死亡_____人
　　被調(diào)查人與患者關(guān)系：　　　　　　　　　　　　　 調(diào)查人簽名：　　　　　　　　
　　調(diào)查人單位：　　　　　　　　　　　　　　　　　 調(diào)查日期：　　年　　月　　日
　　填表說明
　　1．在所選項(xiàng)目前的“□”中，劃“∨”作為選擇答案，若無特殊說明，所有選項(xiàng)均為單選。凡有“　　　”的選項(xiàng)，須填寫相應(yīng)內(nèi)容；
　　2．病例編號(hào)填寫規(guī)定：年號(hào)（兩位數(shù)）、流水號(hào)（后邊三位）
　　3．“2.4暴露程度”參照WHO建議分類標(biāo)準(zhǔn)分為以下三類：
　?、穸龋罕蝗蜻^無開放性傷口的健康皮膚和粘膜；
　?、蚨龋郝懵兜钠つw或粘膜被輕輕咬過，表面劃傷，但沒有破口；
　?、蠖龋喝魏尾课坏钠つw或粘膜，一處或多處被咬破或抓穿。
　　附表2：狂犬病人標(biāo)本送檢登記表
　　　　

　　┌──┬──┬──┬──┬──┬───┬──┬──┬──┬──┬──┬──┐
　　│編號(hào)│患者│性別│年齡│職　│住　址│臨床│發(fā)病│采樣│標(biāo)本│檢驗(yàn)│備注│
　　│　　│姓名│　　│　　│ 業(yè) │　　　│診斷│日期│日期│種類│項(xiàng)目│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├──┼──┼──┼──┼──┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　└──┴──┴──┴──┴──┴───┴──┴──┴──┴──┴──┴──┘
　　送檢單位：_______________________　　采樣人：______________
　　送檢人： ______________　　　　　　　送檢日期：_________年_____月_____日
　　　　附表3：狂犬病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果登記表
　　┌────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬───┐
　　│檢測(cè)項(xiàng)目│ 標(biāo)本 │ 采集 │采集人│ 檢測(cè) │ 檢測(cè) │ 檢測(cè) │檢測(cè)人│ 備注 │
　　│　　　　│ 類型 │ 日期 │　　　│ 方法 │ 結(jié)果 │ 日期 │　　　│　　　│
　　├────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼───┤
　　│核酸檢測(cè)│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│
　　├────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼───┤
　　│抗原測(cè)定│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│　　　│
　　└────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴───┘
　　填表人：　　　　　　　　　　　　　　　 填表日期：______年____月____日
　　　　附表4：狂犬病暴露人群門診登記表
　　　　縣（市、區(qū)、旗）　鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）　填表日期：　年　月　日　 填表人簽字：　頁：
　　┌─┬─┬─┬─┬─┬─┬──┬─┬─┬─┬──┬───────────┬───────┬─┐
　　│編│姓│性│年│被│被│暴露│傷│門│抗│疫苗│接種日期　　　　　　　│　 傷人動(dòng)物　 │備│
　　│號(hào)│名│別│齡│傷│傷│部位│口│診│血│種類├─┬─┬─┬─┬─┬─┼─┬─┬─┬─┤注│
　　│　│　│　│（│地│日│及分│自│傷│清│、批│D0│D3│D7│D1│D2│加│名│類│免│轉(zhuǎn)│　│
　　│　│　│　│歲│點(diǎn)│期│ 級(jí) │行│口│　│號(hào)、│　│　│　│4 │8 │強(qiáng)│稱│別│疫│歸│　│
　　│　│　│　│）│　│　│　　│處│處│　│廠家│　│　│　│　│　│　│　│　│史│　│　│
　　│　│　│　│　│　│　│　　│理│理│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　├─┼─┼─┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼──┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┼─┤
　　│　│　│　│　│　│　│　　│　│　│　│　　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│　│
　　└─┴─┴─┴─┴─┴─┴──┴─┴─┴─┴──┴─┴─┴─┴─┴─┴─┴─┴─┴─┴─┴─┘
　　

　　填表說明： 1．暴露分級(jí)分為三類：Ⅰ度：被犬舔過無開放性傷口的健康皮膚和粘膜；Ⅱ度：裸露的皮膚或粘膜被輕輕咬過，表面劃傷，但沒有破口；Ⅲ度：任何部位的皮膚或粘膜，一處或多處被咬破或抓穿。
　　2．傷人動(dòng)物種類：可分為瘋動(dòng)物、可疑瘋動(dòng)物、正常動(dòng)物（家養(yǎng)、無主動(dòng)物、野生動(dòng)物）、不知道等
　　附表5：狂犬病宿主動(dòng)物基本情況調(diào)查表
　　

　　┌────────┬───┬────────┬────────┐
　　│ 鄉(xiāng)鎮(zhèn)（辦事處） │人口數(shù)│ 動(dòng)物數(shù)量（只） │獸用疫苗數(shù)（份）│
　　│　　　　　　　　│　　　├──┬──┬──┼──┬──┬──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│ 狗 │ 貓 │其它│ 狗 │ 貓 │其它│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　　　　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　├────────┼───┼──┼──┼──┼──┼──┼──┤
　　│　　　合計(jì)　　　│　　　│　　│　　│　　│　　│　　│　　│
　　└────────┴───┴──┴──┴──┴──┴──┴──┘
　　　　填表人：　　　　　　　　　　　　　填表日期：　　 年　 月　 日

　　附件1：狂犬病標(biāo)本采集技術(shù)指南

　　1、采集標(biāo)本者個(gè)人安全防護(hù)

　?。?）從事標(biāo)本采集和運(yùn)送的工作人員均要經(jīng)過專門培訓(xùn)方可進(jìn)行此項(xiàng)工作。

　?。?）從事標(biāo)本采集和運(yùn)送的工作人員均要進(jìn)行暴露前免疫。

　?。?）采集標(biāo)本前要穿戴好防護(hù)服裝、眼鏡、手套，作好技術(shù)上的準(zhǔn)備。

　　2、采集標(biāo)本的包裝：要求使用符合生物安全標(biāo)準(zhǔn)的包裝盒盛放標(biāo)本。

　　3、采集標(biāo)本的時(shí)間、類型和存放

　?。?）在狂犬病病人入院后，盡可能早期采集標(biāo)本。

　?。?）用于病原學(xué)檢測(cè)的標(biāo)本：病人唾液、腦脊液、尿液、鼻咽洗液、咬傷處皮膚組織或病人死后的眼角膜、

腦組織等均可用于病毒的檢測(cè)和分離。以腦組織陽性率最高。

　　（3）用于抗體檢測(cè)的標(biāo)本：無菌采集病例或免疫后血液2～3 ml，分離血清后用于狂犬病特異性抗體的檢測(cè)。

　?。?）標(biāo)本的存放

　　a）用于病毒檢測(cè)和分離的標(biāo)本在－20℃或－20℃以下低溫（－70℃）、液氮、或放在含50％甘油的PBS中

以保持標(biāo)本的感染性，應(yīng)將標(biāo)本盛于無菌容器內(nèi)，放在密封的盒內(nèi)并注明其危險(xiǎn)性以防病毒的擴(kuò)散。

　　b）標(biāo)本要求無菌采集，－20℃保存待檢。

　　4、采集標(biāo)本的運(yùn)送

　　用于病毒檢測(cè)和分離的標(biāo)本，應(yīng)帶冰、干冰或液氮條件下盡快運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。

　　5、采集標(biāo)本的保存

　　負(fù)責(zé)標(biāo)本接收和檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，接到標(biāo)本以后若暫時(shí)不檢測(cè)，應(yīng)立即冷凍保存。用于病毒檢測(cè)和分離的標(biāo)本

可以在－70℃長(zhǎng)期保存，沒有條件的也可以在－20℃條件下短期保存。

　　6、標(biāo)本的檢測(cè)和結(jié)果反饋程序

　　病例調(diào)查及標(biāo)本　　縣CDC實(shí)驗(yàn)室：標(biāo)本處理，病例調(diào)查　　 省級(jí)CDC實(shí)驗(yàn)室：檢測(cè)　　 國(guó)家CDC：疑難病

例、分離毒株。

　　附件2：狂犬病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南

　　1、實(shí)驗(yàn)室條件及生物安全操作要求

　　（1）從事狂犬病臨床和實(shí)驗(yàn)室的工作人員需要暴露前免疫，所有意外暴露于狂犬病毒時(shí)必需立即報(bào)告本部門

負(fù)責(zé)人。

　?。?）操作所有潛在狂犬病感染的材料均應(yīng)在P2或P3（實(shí)驗(yàn)室固定毒在P2，病人或動(dòng)物分離的街毒在P3）生

物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。

　?。?）當(dāng)實(shí)驗(yàn)室對(duì)接收到的動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行操作時(shí)，必須在P3以上條件的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。沒有安全實(shí)驗(yàn)室

（P3級(jí)）的單位，嚴(yán)禁從事病毒分離工作。

　?。?）實(shí)驗(yàn)前要穿戴好防護(hù)服裝、眼鏡、手套，作好技術(shù)上的準(zhǔn)備。

　?。?）由于空氣傳播狂犬病毒已經(jīng)得到證實(shí)，因此高速混懸或離心操作應(yīng)在密閉狀態(tài)下進(jìn)行。

　?。?）實(shí)驗(yàn)后要作好善后消毒處理，狂犬病毒對(duì)脂溶劑（肥皂水、醚、氯仿、丙酮），45～70%乙醇，碘制

劑和四銨化合物敏感，操作完畢對(duì)操作臺(tái)、實(shí)驗(yàn)材料等要用相應(yīng)的消毒劑或高壓蒸汽進(jìn)行消毒處理。

　　2、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)組成及職責(zé)

　　（1）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心牽頭，全國(guó)各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心及所轄區(qū)域內(nèi)的各級(jí)疾病預(yù)防控制中心組

成實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)。

　?。?）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職責(zé)

　　A.診斷試劑的研制、標(biāo)準(zhǔn)化，并推薦質(zhì)量穩(wěn)定可靠的診斷試劑；

　　B.負(fù)責(zé)毒株的鑒定和病毒變異性調(diào)查；

　　C.對(duì)各級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)。

　　D.協(xié)助省級(jí)疾病預(yù)防控制中心完成標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

　　（3）省級(jí)疾病預(yù)防控制中心職責(zé)

　　A.收集、保存轄區(qū)內(nèi)各監(jiān)測(cè)點(diǎn)的各種待檢測(cè)標(biāo)本。

　　B.轄區(qū)內(nèi)各種標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

　　C.對(duì)本省監(jiān)測(cè)點(diǎn)標(biāo)本采集和運(yùn)送給與技術(shù)指導(dǎo)和協(xié)助。

　?。?）縣級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)疾病預(yù)防控制中心職責(zé)

　　采集病例標(biāo)本，運(yùn)送病例標(biāo)本至省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。

　　3、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

　?。?）病原檢測(cè)：

　　A.免疫熒光法檢測(cè)抗原：病人的腦脊髓液或唾液直接涂片、病人的角膜印片或咬傷部位皮膚組織或腦組

織印片或冷凍切片，丙酮固定，抗狂犬病毒特異性熒光抗體染色檢測(cè)狂犬病毒抗原。

　　B.快速狂犬病酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)抗原：用pH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋的抗狂犬病毒核衣殼IgG包被96

孔酶標(biāo)板，4℃過夜；用含0.3％牛血清白蛋白和5% 蔗糖的pH9.6碳酸鹽緩沖液封閉30分鐘；將采集到的標(biāo)

本研磨，用pH 7.4 PBS制成30％的懸液，離心取上清加入酶標(biāo)板孔內(nèi)，同時(shí)設(shè)陰性、陽性對(duì)照，200μl/孔，

37℃孵育1小時(shí)；洗板四次后加入純化的酶標(biāo)記抗狂犬病毒抗體200μl/孔，37℃ l小時(shí)后洗板，加入酶反應(yīng)

底物，室溫作用30分鐘，2M H2SO4終止反應(yīng)，肉眼觀察或酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。

　　（2）核酸檢測(cè)：

　　RT-PCR方法：以特異性擴(kuò)增核蛋白（N）基因最保守區(qū)域?yàn)槟康幕?，設(shè)計(jì)一對(duì)引物：N1（＋）：

5‘-587TTT GAG ACT GCT CCT TTT G605-3’；N2（-）：5‘-1092CC CAT ATA GCA TCC TAC605-3.

唾液、腦脊液、皮膚或腦組織標(biāo)本以及感染病毒后的細(xì)胞培養(yǎng)物或鼠腦均可用于病毒核酸的檢測(cè)?；静襟E為：

待檢標(biāo)本用細(xì)胞總RNA分離試劑提取病毒RNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成與目的基因RNA序列互補(bǔ)的cDNA，PCR循

環(huán)特異性擴(kuò)增目的基因cDNA，電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，判斷檢測(cè)結(jié)果。

　　（3）病毒分離：抗原或核酸檢測(cè)陽性標(biāo)本可以進(jìn)行病毒分離以便進(jìn)行更深入的研究。

　　A.細(xì)胞培養(yǎng)法分離病毒：將唾液、腦脊液、皮膚或腦組織標(biāo)本研磨后，用PBS或MEM制成30％懸液→4℃ 

2000r/min離心20分鐘→取上清接種在96孔或24孔培養(yǎng)板內(nèi)已形成單層的敏感細(xì)胞（鼠神經(jīng)傳代細(xì)胞、Vero細(xì)

胞或BHK21 細(xì)胞）上，吸附2小時(shí)后補(bǔ)加含2%血清的維持液，37℃ 5％C02 孵育約4～5天，丙酮固定感染后的

細(xì)胞，用抗狂犬病毒單克隆抗體觀察特異性熒光包涵體判斷結(jié)果。陽性時(shí)吸取上清至一無菌容器內(nèi)-70℃保存?zhèn)?/pre>
用或繼續(xù)傳代。病毒通過細(xì)胞的多次傳代可以適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)并得到擴(kuò)增。
　　B.乳小白鼠接種法分離病毒：30％的病人或動(dòng)物腦組織懸液，離心取上清，接種1～2日齡乳鼠腦內(nèi)，每個(gè)
樣品注射一窩乳鼠；注射后的乳鼠應(yīng)在具有高效濾過裝置的負(fù)壓飼養(yǎng)柜內(nèi)飼養(yǎng)。癥狀不典型時(shí)可于接種第一代
后取腦繼續(xù)傳代，連續(xù)傳代后潛伏期逐漸規(guī)律，一般為5天左右。發(fā)病乳鼠若確定為狂犬病毒感染，無菌取腦，
-70℃或用含50％甘油的PBS -20℃保存，也可研磨后加滅菌脫脂牛奶制成20％懸液，真空冷凍干燥，長(zhǎng)期保
存。未發(fā)病存活的鼠保留至21天后殺死作免疫熒光檢測(cè)
　?。?）抗體檢測(cè)
　　A.特異性抗體檢測(cè)：在自然感染情況下，狂犬病毒通常由被瘋動(dòng)物咬傷時(shí)通過其帶有病毒的唾液進(jìn)入機(jī)體
傷口內(nèi)，在入侵部位狂犬病毒基本上不增殖，一般也不侵入血流，故不能形成病毒血癥。因此，在感染后的一
段時(shí)間內(nèi)狂犬病毒或其抗原不能與機(jī)體免疫系統(tǒng)廣泛接觸，不能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生抗狂犬病毒感染的免疫應(yīng)答
反應(yīng)?？袢〉耐砥谝蜓X屏障作用被破壞，腦內(nèi)大量病毒抗原得以進(jìn)入血流，可以刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生
大量特異性抗體。因此，許多狂犬病人在發(fā)病早期血清中查不到抗體或抗體滴度很低，狂犬病特異性抗體只在
臨床疾病的晚期出現(xiàn)。
　　B.中和抗體檢測(cè)：狂犬病疫苗免疫后血清中和抗體水平是測(cè)定疫苗免疫力程度的評(píng)判指標(biāo)，WHO狂犬病專
家委員會(huì)認(rèn)為中和抗體水平等于或高于0.5IU/ml血清，表示能得到有效的保護(hù)。狂犬病毒中和抗體的檢測(cè)可
以用傳統(tǒng)的小鼠中和試驗(yàn)或WHO推薦的快速熒光灶抑制試驗(yàn)（RFFIT）。RFFIT試驗(yàn)時(shí)倍比稀釋已經(jīng)滅活的血
清樣品，同時(shí)設(shè)陰、陽性血清對(duì)照。病毒用標(biāo)準(zhǔn)固定毒CVS株，細(xì)胞用BHK21細(xì)胞系。首先將稀釋的被檢及對(duì)
照血清0.1ml加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，再在各血清孔中加入0.1m1標(biāo)準(zhǔn)病毒稀釋液（100TCID50），37℃中和
1.5小時(shí)；然后每孔加入細(xì)胞，37℃、5% C02培養(yǎng)過夜后棄掉培養(yǎng)液，PBS洗一次，丙酮固定。干燥后，加熒
光素標(biāo)記的抗狂犬病毒抗體，37℃ 30分鐘，PBS洗3次，熒光顯微鏡觀察結(jié)果：比較實(shí)驗(yàn)組和陰性血清組的熒
光灶，實(shí)驗(yàn)組中能使熒光灶抑制≥50％的血清最高稀釋倍數(shù)，即為被檢血清的中和抗體滴度。